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Nanoprobes丨AuroVist 15 nm:金血池 X 射线造影剂

武汉艾美捷科技有限公司2022年8月5日 1:51 点击:1018

NanoprobesAuroVist 15 nm:金血池 X 射线造影剂

 

“金纳米粒子 (AuNp) 正成为最有前途的 CT 造影剂之一,因为它们具有非凡的特性,包括高 X 射线吸收系数、定制的表面化学和出色的生物相容性。”


 
静脉注射 AuroVist-15nm 后,活体小鼠腿部和骨盆区域周围的 20µm 血管

艾美捷 Nanoprobes 金纳米粒子:一种新的 X 射线造影剂,特点:

1.任何血池造影剂的最高对比度

2.任何可用造影剂中最长的血液停留时间 - 24 小时!

3.200 mg Au/mL 注射到小鼠体内会在血管中产生 1800 HU

4.低毒:LD50 >5.0 g Au/kg

5.低渗透压,即使在高浓度下

6.低粘度,类似于水;易于注射,甚至可以注入小血管

7.长成像时间和高对比度:

8.非常适合 microCT 成像

9.可浓缩至 600 mg Au/mL 以获得超强对比度

10.大小可使用 EPR - 从血流中泄漏到血管生成癌组织中,用于治疗诊断

 

艾美捷 Nanoprobes 剂量指南:每 40 毫克小瓶有多少只小鼠?

据报道,每 40 mg 小瓶 10 只小鼠一般使用效果很好。

40 mg 小瓶 2 只小鼠产生非常高的对比度。星云尼等人。在 2013 年的比较研究中使用此剂量,发现衰减为 2.33/mm,比同等剂量的其他 X 射线造影剂要好得多。

对于超分辨率,每只鼠标使用整个 40 mg 小瓶。这是Hainfeld 等人 2013 年论文中使用的剂量。在我们的实验室中,即使是非常高的剂量,我们也没有发现毒性问题——到目前为止,我们只受到小鼠可以服用的总体积的限制。

请记住,血液的半衰期为 24 小时,因此即使在单次注射后几天也可以重复成像:

“由于金纳米粒子的清除过程缓慢,在注射后 2 天和 3 天仍然可以对血管进行解剖表示。AuroVist 15 nm 的这一特殊功能可能允许在不重复注射或使用较低剂量对比剂的情况下进行后续成像材料。” (星云,2013

 

艾美捷 Nanoprobes AuroVistGold X 射线造影剂

#1115-40MGAu AuroVist15 纳米

含有 40 mg 金金属的15 nm金纳米粒子。溶解在 0.2 mL 磷酸盐缓冲盐水中(PBS20 mM 磷酸钠和 150 mM 氯化钠,pH 7.4),通过 0.22 µm 过滤器过滤。

 

#1115A-5X40MGAu AuroVist15 nm 5

五瓶15 nm金纳米颗粒,每瓶含 40 mg 金金属。溶解在 0.2 mL 磷酸盐缓冲盐水中(PBS20 mM 磷酸钠和 150 mM 氯化钠,pH 7.4),通过 0.22 µm 过滤器过滤。

 

Nanoprobes专注于免疫金标记和免疫测定试验领域,为广大科研机构提供用于检测生物分子的最灵敏的试剂和技术。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml

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Nanoprobes丨二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-十一金中文说明

 

名称:二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-十一金

目录号:4023

外观:黄橙色固体

 

一般信息:

UNDECAGOLD 是可用的最小的金标签,使用离散的金化合物而不是胶体制备。1 DPPE-UNDECAGOLD 0.8 nm UNDECAGOLD 颗粒共价连接到单个二棕榈酰磷脂酰乙醇胺分子组成。共轭是通过分子的乙醇胺头上的胺基。它旨在用作与胶束和其他双相系统一起使用的脂质标签。其结构如图1所示:

1:二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-UNDECAGOLD的结构(未按比例显示)

 

DPPE-UNDECAGOLD 以固体形式提供,从二氯甲烷溶液中干燥。收到后应冷冻,并储存在-20°C

警告:仅供研究使用。不推荐或不用于诊断人类或动物的疾病。不要在人类或动物体内或外部使用。无放射性和致癌性。

 

艾美捷 Nanoprobes 二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-十一金使用说明:

DPPE-UNDECAGOLD 具有疏水性,可以插入胶束等系统中的有机相中(参考文献 2)。它微溶于甲醇和甲醇-三氯甲烷和甲醇-二氯甲烷混合物。UNDECAGOLD 在特定波长下具有以下消光系数:

波长 (nm) 消光系数*

280 1.7×10 5

420 0.47 X 10 5

* 测量 5 X 10-6 M 甲醇溶液。

一旦掺入胶束或其他结构中,它就可以按照与未标记的 DPPE 相同的方式根据各个实验所需的程序使用。

 

艾美捷 Nanoprobes Undecagold 试剂染色的一般注意事项

基本上,正常的方法可以成功地与 UNDECAGOLD 免疫试剂一起使用。抗体和金的浓度与胶体金探针的其他商业制剂相似。因此,类似的稀释剂和封闭剂是合适的。

主要区别在于结果:

1.UNDECAGOLD 是一种极其均匀的 0.8 nm 直径金颗粒 (ca.10%)

2.UNDECAGOLD 偶联物绝对不含聚集体。这与通常通过离心制备以去除最大聚集体并经常包含较小聚集体的其他胶体金结合物形成鲜明对比。

3.接近 1 UNDECAGOLD 颗粒对 1 个脂质分子使该产品与其他胶体金抗体偶联物的 0.2 - 10 可变化学计量不同。

4.UNDECAGOLD 颗粒不像其他胶体金那样对蛋白质具有亲和力。这减少了背景和错误标记。

 

使用带有 Undecagold 的污渍:

因为 0.8 nm UNDECAGOLD 颗粒非常小,用四氧化锇、醋酸铀或柠檬酸铅过度染色会掩盖单个 UNDECAGOLD 颗粒的直接可视性,因此不应使用这些染色剂。只能使用低原子序数染色的浅色染色,例如 NANOVAN,一种钒基负染色。

 

艾美捷 Nanoprobes 二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-十一金参考文献:

1.Hainfeld, J. F., in "Colloidal Gold: Principles, Methods and Applications;" M. A. Hayat, (Ed.); Academic Press, San Diego, 1989; Vol. 1, p. 413.

2.Hainfeld, J. F.; Lipka, J. J., and Quaite, F. E.; J. Histochem. Cytochem., 38, 1795 (1990).

3.Lipka, J. J., Hainfeld, J. F., and Wall, J. S., J. Ultrastruct. Res., 84, 120 (1983).

4.Hainfeld, J. F., and Furuya, F. R. in Immunogold-Silver Staining: Principles, Methods and Applications; Hayat, M. A. (Ed.); CRC Press, Boca Raton, FL, 1995, p. 71.

 

Nanoprobes专注于免疫金标记和免疫测定试验领域,为广大科研机构提供用于检测生物分子的最灵敏的试剂和技术。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml

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NanoprobesNanogold 标记条带的凝胶染色

 

在用 艾美捷 Nanoprobes Nanogold® 标记蛋白质或其他分子后,它可以在聚丙烯酰胺凝胶上运行。随后,可以使用LI SilverGoldEnhance™对其进行显影,以对含金条带进行特异性染色。该过程快速、灵敏且具有选择性,只需几分钟即可形成密集染色。它也适用于转移印迹。这可用于区分哪些组件标有 Nanogold®

 

LI Silver增强方案:使用 LI Silver 进行凝胶染色轻松检测凝胶和印迹上 的 Nanogold® 标记分子

  

艾美捷 Nanoprobes LI Silver增强方案特色:

1.银增强剂凝胶染色:LI Silver

2.具体:仅开发 Nanogold® 标记带

3.快速:1-5分钟

4.敏感:比通常的凝胶染色剂更敏感

5.可直接用于凝胶或印迹转移

 

1.4 nm Nanogold® 粒子可以与银一起显影,使它们变得肉眼可见,从而将信号放大数千倍。如果您使用 monomaleimido-Nanogoldmono-NHS-Nanogold® mono-amino-Nanogold® 标记蛋白质或其他分子,则可以使用银增强剂在凝胶上轻松分析和检测。

 

以下是检测凝胶或印迹上 艾美捷 Nanoprobes Nanogold® 标记条带的方案:

1.Nanogold® 标记后,通过柱层析、蔗糖梯度或其他纯化方法去除未结合的金颗粒。在样品中留下过量的游离 Nanogold® 会干扰预期的凝胶染色。

2.像往常一样运行凝胶,有两个预防措施:

A) Nanogold® 会被 β-巯基乙醇(或 DTT)降解,因此样品不得与还原剂混合,即必须运行非还原凝胶。其他成分(SDS 等)的正常浓度是可以接受的。

B) 样品不得加热。上样前,样品经常在 SDS 中煮沸。由于 Nanogold® 50°C 以上会降解,因此不建议加热。这通常不是限制,因为大多数样品无需加热即可获得正常的凝胶图案。

3.如果需要,可以将凝胶电转移到硝酸纤维素上,但这不是必需的。

4.用几次去离子水冲洗凝胶。由于银显影剂会被卤化物沉淀,因此必须去除痕量的 NaCl

5.将凝胶或印迹置于合适的培养皿中,并涂上足够的新鲜制备的 LI Silver(目录号 2013)以覆盖凝胶。LI 银是通过混合等量的 A B 组分制备的。不要使用与 LI Silver 完全不同的常用凝胶银染剂,也不能有效地开发 Nanogold®

6.观察应该呈现棕黑色的带的发展。未进入凝胶的含金聚集体或少量游离金可能会产生背景染色。通常的开发时间是 1-5 分钟。较长的显影时间(> 30 分钟)将导致仅由显影剂进行一些非特异性背景自成核染色。

7.当达到最佳染色时,通过在去离子水中冲洗来停止显影。最后的染色凝胶现在是永久记录。

8.对于所有条带的比较和可视化,运行重复凝胶并用考马斯蓝或凝胶银染色剂染色。

9.由于 Nanogold® 颗粒的重量增加(约 15,000),Nanogold® 标记的分子在凝胶上的运行通常高约 15,000 MW。因此,标记和未标记的分子被分开,它们的比例可以通过显示总蛋白质含量的常用凝胶染色(考马斯或凝胶银染色)来估计。

 

文献参考:

1.Gregori, L., J. F. Hainfeld, M. N. Simon, and D. Goldgaber. 1997. Binding of amyloid beta protein to the 20S proteasome. J Biol Chem 272 (1): 58–62

2Wilkens, S. and Capaldi, R.A. Monomaleimidogold labeling of the gamma subunit of the Escherichia coli F1 ATPase examined by cryoelectron microscopy. Arch Biochem. Biophys., 229, 105-109 (1992).

 

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NanoprobesNanogold 印迹和免疫化学技术

 

Nanogold®-抗体偶联物已用于在免疫点印迹分析中检测 < 0.1 pg (7 X 10 -19摩尔) 的抗原。这种灵敏度优于大多数放射性、酶促、胶体金或荧光技术。事实上,Nanogold® 标记是已知的最灵敏的检测方法之一。它可以与化学发光相媲美,但可以提供永久记录,无需胶片、显影和暗房程序,而且时间更短。Nanogold® 试剂也可用于西方人,Nanogold®-链霉亲和素或 Nanogold®-抗生物素偶联物可提供超灵敏的核酸检测。

  

艾美捷 Nanoprobes Nanogold® 免疫印迹

Nanogold®-anti-mouse Fab' 印迹小鼠 IgG,由 LI Silver (Nanoprobes) 开发。这些超小的金颗粒使银沉积成核,从而实现了前所未有的灵敏度。该免疫点印迹显示 0.1 pg 灵敏度(箭头)。

 

使用艾美捷 Nanoprobes的银增强剂和金增强剂,开发你的肉眼印迹。

 

用于 EM LM 的银增强套件:自动金相的工作原理:

在合适的还原剂存在下,金属颗粒可以使银的高度特异性沉积从合适的银盐溶液中成核。然后镀银的金颗粒催化更多的银沉积,并且银颗粒尺寸增大。

 

艾美捷 Nanoprobes银增强剂应用:

显微镜:

在电子显微镜下,1.4 nm Nanogold® 发展为圆形晶粒,当 < 20 nm 时尺寸变化更大。然后发展放缓,较小的颗粒“迎头赶上”。在 80 nm 处,来自 1.4 nm Nanogold® 的所有银颗粒都非常均匀。对于 HQ Silver,这会在大约 3 分钟的开发期后发生,或者对于 LI Silver,会在 ^7 分钟后发生。在光学显微镜下,使用 Nanogold® 试剂和 LI Silver 可实现出色的穿透性、低背景和超灵敏染色。

 

免疫印迹、聚丙烯酰胺凝胶、Westerns 和核酸检测:

具有银增强功能的 Immunogold 提供了简单、稳定和永久记录的检测方法,具有超高的灵敏度。Nanogold® 可以以合理控制和均匀的方式生长,以产生尺寸为 ^2 >100 nm 的颗粒,银显影时间为 ^30 秒至 ^30 分钟。较小的尺寸非常适合 EM 工作,而中等尺寸则适用于光学和共聚焦显微镜。最大尺寸可提供超灵敏的肉眼可视化,可用于免疫印迹、凝胶和蛋白质印迹。

 

艾美捷 Nanoprobes Nanogold® 标记条带的凝胶染色:

在用 Nanogold® 标记蛋白质或其他分子后,它可以在聚丙烯酰胺凝胶上运行。随后,它可以与 LI Silver 一起显色,以对含金条带进行特异性染色。该过程快速、灵敏且具有选择性,只需几分钟即可形成密集染色。它也适用于转移印迹。这可用于区分哪些组件标有 Nanogold®

 

Nanoprobes专注于免疫金标记和免疫测定试验领域,为广大科研机构提供用于检测生物分子的最灵敏的试剂和技术。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

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Nanoprobes原位杂交:基因检测的演变(从 NanogoldEnzMet

 

如何在 DNA(和 RNA)组合在一起后通过原位杂交来检测它?接下来一起看看原位杂交:基因检测的演变,从 Nanogold® EnzMet™。

 

艾美捷 Nanoprobes 关于Nanogold®原位杂交的文章最近非常火,紧接着,一种强大的原位杂交新技术:EnzMet ™诞生了。

 

Nanoprobes的原位杂交技术都有自己的应用范围;在这里收集了一些资源来帮助用户选择适合的研究领域的方法。

 

Human Pathology的专题文章讨论了多种原位杂交检测方法的发展、特点和比较优点,包括:

1.Nanogold® 银增强

2.Nanogold® 与金增强 (GOLDFISH)

3.EnzMet ™(原名 酶金相)

这些原位杂交方法在开发用于HER2基因扩增的显色测定的背景下进行了讨论;这是乳腺癌中恶性肿瘤行为的重要指标,也是用于评估患者接受人源化单克隆抗体治疗(赫赛汀/曲妥珠单抗)的标准之一。

 

艾美捷 Nanoprobes 金相原位杂交的演变:

(a)(b):通过酪胺信号放大(TSA,也称为CARD,或催化的报道分子沉积)检测SiHa细胞中HPV-16的单拷贝,然后用(a)DAB开发的链霉亲和素-过氧化物酶检测,和(b) streptavidin-Nanogold® 与醋酸银自动金相学。HPV-16 的副本显示为单点。(H & E 复染。原始放大倍数 X 560)。

 

(c) Nanogold® 与金增强 (GOLDFISH) 程序在具有 HER2 基因扩增的组织中,显示来自紧密接近的多个基因拷贝的大的、汇合的核信号。核固红复染剂(原始放大倍数 400)。

 

(d) : EnzMet™ 检测石蜡包埋的人类浸润性乳腺癌活检中单个 HER2 基因拷贝的扩增;正常、未扩增的细胞包含 HER2 基因的两个拷贝,而浸润性 HER2 扩增的癌细胞显示多个拷贝(原始放大倍数 X 400。图片由克利夫兰诊所基金会的 RR Tubbs 博士提供)。

 

文献参考:

1.Powell, R. D.; Pettay, J. D.; Powell, W. C.; Roche, P. C.; Grogan, T. M.; Hainfeld, J. F., and Tubbs, R. R.: Metallographic in situ hybridization. Hum. Pathol., 38, 1145-1159 (2007).

Abstract and full article available on the Human Pathology website

Institutional access at SciVerse ScienceDirect

2.Tubbs, R. R.; Pettay, J.; Skacel, M.; Downs-Kelly, E.; Powell, R. D.; Hicks, D. G., and Hainfeld, J. F.: Gold and Silver-Facilitated Metallographic In Situ Hybridization Procedures for Detection of HER2 Gene Amplification. In: Molecular Morphology in Human Tissues; Hacker G.W., and Tubbs, R. R. (Eds): CRC Press, Boca Raton, FL. Ch. 5, pp. 101-106 (2005).

Full text available from CRCNetBase (Shibboleth, Athens)

3.Tubbs, R.; Pettay, J.; Hicks, D.; Skacel, M.; Powell, R.; Grogan, T., and Hainfeld, J.: Novel bright field molecular morphology methods for detection of HER2 gene amplification. J. Mol. Histol., 35, 589-594 (2004).

Abstract and full text available from SpringerLink.

 

Nanoprobes专注于免疫金标记和免疫测定试验领域,为广大科研机构提供用于检测生物分子的最灵敏的试剂和技术。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml

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NanoprobesEnzMet 用于免疫组织化学 (IHC) 和印迹

 

艾美捷 Nanoprobes EnzMet 不仅仅用于原位杂交的光学检测。它对于生物芯片上的 DNA的电检测也非常有效,在使用电极阵列对目标 DNA 进行电检测方面,它提供了优于银增强胶体金的改进。现在,在他们最近的生物传感器和生物电子学论文中、SchülerFritzsche 和同事证明,该过程可用于丝网印刷电极结构,用于基于芯片的病毒 DNA 电检测(人类 CMV DNA 150 bp PCR 产物)。这些电极阵列是在玻璃基板上生产的,从而可以进行额外的光学读出。丝网印刷结构显示出所需的精度,并与应用的生化协议兼容。与标准光刻法生产的芯片基板相比,丝网印刷芯片表现出相同的灵敏度和特异性。

 

因此,用于电检测的 DNA 芯片电极阵列的丝网印刷为生产具有微结构电极的 DNA 芯片提供了一种有趣且具有成本效益的方法。也可使用NanoprobesEnzMet TM HRP 检测试剂盒用于研究应用程序(目录号 6010)。

 

参考文献:

Schüler T, Asmus T, Fritzsche W, Möller R.: Screen printing as cost-efficient fabrication method for DNA-chips with electrical readout for detection of viral DNA. Biosens. Bioelectr., 24, 2077-2084 (2009).

Abstract (courtesy of Science Direct).

 

艾美捷 Nanoprobes EnzMet TM也是免疫组织化学 (IHC) 的理想检测和可视化方法,它可用于高度敏感的检测,具有最小的背景和非常高的印迹对比度. 使用高复杂性组织微阵列 (TMA) 测试免疫组织化学应用。使用自动载玻片染色系统 (Ventana Medical Systems) 通过酶金相 (EnzMet) 评估 88 种常见实体瘤;选择靶点来评估 EnzMet TMA 中特异性定位细胞核(雌激素受体)、细胞质(细胞角蛋白)和细胞质膜 (HER2) 中编码抗原的能力。评估的所有三种抗原的染色强度与乳腺肿瘤以及肾癌、结肠癌和前列腺癌相当。

 

然而,与 DAB 相比,EnzMet IHC 制剂中的染色质量要清晰得多,并且染色沉积物更清晰,显示出更多的点状外观。EnzMet 和传统 IHC 结果完全一致。EnzMet 反应产物密集且清晰,没有明显扩散,并为评估的核、细胞质和细胞膜定位抗原的石蜡切片中的细胞隔间提供了出色的高分辨率分化。在酶金相过程中沉积的元素银的较高密度允许在相对较低的放大倍数下评估核心免疫表型,而无需油浸,从而可以有效地筛选更多组织。此外,信号稳定并提供永久记录。在酶金相过程中沉积的元素银的较高密度允许在相对较低的放大倍数下评估核心免疫表型,而无需油浸,从而可以有效地筛选更多组织。此外,信号稳定并提供永久记录。在酶金相过程中沉积的元素银的较高密度允许在相对较低的放大倍数下评估核心免疫表型,而无需油浸,从而可以有效地筛选更多组织。此外,信号稳定并提供永久记录。

 

参考文献:

Tubbs R.; Pettay J.; Powell R.; Hicks D. G.; Roche P.; Powell W.; Grogan T., and Hainfeld, J. F.: High-resolution immunophenotyping of subcellular compartments in tissue microarrays by enzyme me

 

对于免疫组织化学,使用艾美捷 NanoprobesEnzMet EnzMet HRP 检测试剂盒用于 IHC/ISH(目录号 6001)。

左图:石蜡包埋的人膀胱肿瘤中上皮细胞角蛋白的免疫过氧化物酶染色:

a)用 DAB 进行的继发性免疫过氧化物酶;( b ) 使用 EnzMet TM的二级免疫过氧化物酶法(原始放大倍数 x 400)。

右图:使用 ( c ) DAB ( d ) EnzMet TM开发的 HRP 偶联物对带有 his 标签的融合蛋白进行蛋白质印迹检测的比较。

转移后,将膜与抗 His-Tag (6xHis) 单克隆抗体一起孵育,然后进行 BSA 封闭,然后暴露于偶联辣根过氧化物酶 (HRP) 的二抗。然后通过 DAB 检测(图 A)或 EnzMet TM检测(图 B)可视化带有 His 标签的融合蛋白。泳道140.1 µg 34 kDa his-tagged ATF-1。泳道250.1 µg 68 kDa his-tagged YY1。泳道360.1 µg BSA 0.1 µg 卵清蛋白

 

在大多数情况下,以下使用EnzMet TM进行印迹的 EnzMet TM协议可以替代传统的 DAB 开发,而无需进一步修改协议。然而,由于其更高的灵敏度,可能需要对一抗或二抗探针进行更大的稀释,以实现灵敏度和清晰度的最佳组合。已发现 5 倍至 10 倍的额外稀释在免疫组织化学实验中产生良好的结果,并且在这里也可能是合适的。

 

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NanoprobesHQ Silver 银增强试剂解决方案

 

艾美捷 Nanoprobes HQ Silver是一种特的银增强试剂。它含有一种增稠剂,它是一种天然聚合物胶:用于调节混合物与金纳米粒子的反应速率。这使该试剂具有许多优势,与其他银增强剂相比,其性能有所提高,如下图所示:

1.颗粒的发展速度非常均匀,一旦放大,银增强的金颗粒具有高度的尺寸单分散性。

2.混合试剂的pH值接近中性。这意味着 pH 对组织和细胞的影响最小化,并且试剂与尽可能高比例的金颗粒反应。虽然它比LI Silver或其他一些银增强试剂发展得更快(典型的显影时间为 1 8 分钟),但反应可控且精确,最终粒径可通过改变显影时间来调整。

3.离子强度非常低。这确保了对标本超微结构的影响最小,因此可以很好地保存组织。

Nanogold® HQ Silver 预嵌入免疫电子显微镜。Nanogold-Fab' 山羊抗兔 IgG 二抗标记大鼠脑中的 K+ 通道 Kv2.1 亚基,然后进行 HQ Silver 增强。注意免疫染色的高密度和特异性,甚至阐明亚基定位到细胞膜的细胞质侧和高尔基体的外层;轴突和末端明显是阴性的。J. Du, J.-H. 所做的工作。Tao-ChengP. Zerfas CJ McBain,美国国立卫生研究院。参见 Neuroscience, 84 , 37-48 (1998)。巴 = 1 微米。

 

这些特性使 HQ Silver 成为电子显微镜的理想选择,但由于天然增稠剂的存在,与其他一些银增强试剂相比,这些成分更容易受到微生物污染,而且它们的粘性意味着可能需要使用更多小心使用该试剂。

 

使用艾美捷 Nanoprobes HQ Silver 时,需要使用以下提示和技巧获得佳效果:

1.HQ Silver 必须在不允许微生物污染和生长的条件下储存。如果您计划在几天内不使用该试剂,则应将组件冷冻保存,最好在 -20°C 下保存。

2.反复冻融循环会降低增稠剂的性能。因此,当您第一次使用 HQ Silver 时,如果您将每个组分分成等份,每个等份足以满足您的典型实验运行,然后分别冷冻未使用的等份,您将在试剂的整个生命周期内获得最佳结果。然后,每次您进行需要 HQ Silver 的实验或一系列实验时,解冻并混合一组等分试样。

3.因为这些成分包含不同量的增稠剂,它们具有不同的粘度,如果它们被快速分配,则分配等量可能具有挑战性。您将使用可调节的移液器套件来吸取和分配所需的量,并为每个组件使用不同的吸头,从而获得最佳效果;慢慢画有助于避免气泡。正排量移液器是最好的。慢速手动抽取实际上比自动抽取更可取,因为它可以更准确地分配粘性溶液。组分 B调节剂)实际上不包含任何一种银沉积所必需的组分:因此,如果先分配 B,然后分配 A C,您将确保混合和添加到样品之间的最短延迟。

4.用这些溶剂和缓冲液在使用前经过脱气,以消除溶解氧和形成气泡的风险。如果需要搅拌溶液,请使用低设置的涡旋器,而不是手动搅拌;如果长时间轻轻搅拌(例如使用印迹或载玻片),请使用低设置的旋转摇床 - 与手动搅拌相比,这些会引入更少的气泡。

 

对于超微结构保存和均匀粒径不成问题的光学显微镜和印迹应用,可以考虑使用艾美捷 Nanoprobes LI Silver。该试剂显影较慢,并且由于它是无色且无粘性的,因此可以通过光学显微镜或其他光学检测方法更容易地监测显影。或者,黄金增强可能会在某些应用中提供更好的结果。

 

Nanoprobes专注于免疫金标记和免疫测定试验领域,为广大科研机构提供用于检测生物分子的最灵敏的试剂和技术。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml

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Nanoprobes高分辨率 EM 和印迹新技术:NTA-Ni(II)-Nanogold

 

艾美捷 Nanoprobes Ni-NTA-Nanogold®是一种新型金探针,其靶向剂不是抗体或蛋白质,而是金属螯合次氮基三乙酸 (NTA) (II),它与多组氨酸 (His) 标签高度选择性结合。由于 His 标签可以很容易地工程化到表达的蛋白质中,NTA-Ni(II)-Nanogold可用于定位多种重组 His 标签蛋白质,并且由于它比抗体小得多,因此它提供了更高的分辨率。

 

右图:用 6x-His 标签克隆的来自腺病毒的旋钮蛋白,用 Ni-NTA-Nanogold 标记,从过量金中纯化的柱子,在扫描透射电子显微镜 (STEM) 中观察,未染色(全宽约 245 nm)。左图:Ni-NTA-Nanogold 的结构,显示了掺入的金属螯合物与 His 标签蛋白的结合。插图显示了分辨率,表示为从 Nanogold 粒子中心到 His 标签的距离:请注意,这明显短于抗体的等效距离。

 

这些特性使 HQ Silver 成为电子显微镜的理想选择,但由于天然增稠剂的存在,与其他一些银增强试剂相比,这些成分更容易受到微生物污染,而且它们的粘性意味着可能需要使用更多小心使用该试剂。

 

艾美捷 Nanoprobes Ni-NTA-Nanogold™ 与传统抗体探针相比具有几个显着优势:

1.更好的渗透性:由于它非常小,NTA-Ni(II)-Nanogold 可以更容易地渗透到样品中并进入样品内的空间受限位点,并且对其超微结构的干扰更少。在某些系统中,它可以用于更强的固定或更少的透化,从而使标记具有更好的超微结构保存。

2.更高的标记分辨率。次氮基三乙酸 - Ni(II) 螯合物比抗体或蛋白质小得多,因此当它结合时,金更接近其目标。这使得 NTA-Ni(II)-Nanogold 非常适合以分子分辨率定位蛋白质复合物或其他大分子组装体中的位点。

3.NTA-Ni(II)-Nanogold 是使用改性金颗粒制备的,具有非常高的溶解度和稳定性。它的大小为 1.8 nm,很容易通过电子显微镜观察到。

新的 15nm 版本在 EM 下直接可见,无需金或银显影。

4.Ni(II)-NTA 的结合常数非常高,这是由于多个组氨酸结合的螯合效应和多个 Ni(II)-NTA 功能化的靶结合的结合。解离常数估计在10 -710 -13 M -1之间。对于许多应用,这提供了与抗体相当的结合强度。

 

应用包括:

对含有重组 His 标签蛋白的蛋白质、蛋白质复合物或细胞器进行高分辨率标记,用于 EM1 STEM2 定位。

光系统 II 的两个不同亚基的标记和分子定位。

组织切片中带His标签的蛋白质的通用预嵌入标记,用于电子显微镜观察。

Ni-NTA 柱纯化过程中识别馏分中的 His 标签蛋白。

检测印迹和凝胶中的重组 His 标签蛋白。

用于图像分析和结构求解的规则结构的重原子标记。

 

艾美捷 Nanoprobes Ni-NTA-Nanogold®已在低温电子显微镜中得到广泛应用。一个例子,最近一篇关于革兰氏阴性菌多糖输出系统的综述,是Wzc 中结构域的定位,Wzc是一种酪氨酸自激酶,在多糖的协调生物合成和分泌过程中起核心作用,构成保护膜的多糖。包封的大肠杆菌来自宿主免疫防御的细菌。荚膜由 K 抗原荚膜多糖形成:其组装和易位需要内膜和外膜中的蛋白质,而内膜蛋白 Wzc 起着关键作用:缺乏 Wzc 的突变体无法聚合高分子量的荚膜聚合物。Wzc 的同源物已在许多不同革兰氏阴性和阳性细菌的外聚合物生物合成系统中被鉴定出来,因此这种蛋白质的结构和功能具有相当大的意义。

 

艾美捷 Nanoprobes NTA-Ni(II)-Nanogold用于用N标记 Wzc-终端His标签(His6-Wzc);Nanogold 标记既可用作重原子衍生物以帮助定相,也可用作高分辨率标记以确定膜内复合物的方向。比较使用和不使用 Nanogold 标记获得的分子包膜表明,用 NTA-Ni(II)-Nanogold 孵育的 Wzc 颗粒与没有 Nanogold 的颗粒基本相同,但很容易观察到多种金密度与蛋白质结合。使用较小的金标记数据集,生成了分辨率约为 22 Å 的第二个三维结构,该结构显示体积内包含额外的结合金密度。在两个位置发现了纳米金:在根部区域的上半部分,以及由牙冠下方的根部形成的空腔底部。第二个位置与蛋白质包膜没有物理连接,因此可能代表非特异性结合或捕获的金颗粒。然而,Nanogold 在任一位置的存在表明根部含有N端,因此在细胞质中,而冠在周质中。

 

Nanoprobes专注于免疫金标记和免疫测定试验领域,为广大科研机构提供用于检测生物分子的最灵敏的试剂和技术。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml

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NanoprobesGoldiBlot ™ 用于 His-tag 检测方案

 

如果厌倦了冗长的蛋白质印迹实验方案,可以看看艾美捷 Nanoprobes GoldiBlot TM,这是Nanoprobes在蛋白质印迹和其他免疫印迹中检测 His 标签蛋白的新系统。黄金印迹是一种新型检测系统,可在一小时内对任何带有多组氨酸标签的蛋白质提供纳克级检测灵敏度。它基于Nanoprobes Nickel(II)-NTA-gold(次氮基三乙酸 - Ni(II) - 金)技术,结合快速自动金相放大,其中金属选择性地沉积在结合的金颗粒上。下面显示了原理,以及在蛋白质印迹中对带 His 标签的蛋白质进行染色所获得的结果。与用于有机显色剂的金属增强工艺不同,这可以产生干净、清晰的信号,而无需额外的试剂或步骤。

 

左图:使用 GoldiBlot TM HIS 蛋白检测试剂盒对 His 标签蛋白进行蛋白质印迹检测。泳道 M:全蓝蛋白阶梯。泳道 1-5His 标记的 ATF-1 2.550 ng ( 1 ) 50 ng( 2 ) 25 ng( 3 ) 10 ng( 4 ) 5 ng ( 5 ) 2.5 ng 加载。( 6 ) 100 ng His 标记的 YY1( 7 ) 100 ng His 标记的 Src( 8 ) 50 ng His-tagged Src 和细菌提取物,含 2,500 ng 总大肠杆菌蛋白。( 9 ) 含有 2,500 ng 总大肠杆菌蛋白的细菌提取物。

右图:GoldiBlot TM的工作原理:Ni-NTA-Gold 与带 His 标签的蛋白质结合,然后对金颗粒进行自动金相放大以使其可见。

 

艾美捷 Nanoprobes GoldiBlot TM的特点和优势包括:

1.在一小时内检测 His 标签蛋白。

2.洋红色条带中带 His 标签的蛋白质的直接可视化。不需要胶片、放射自显影或磷光成像仪。

比抗体更稳定。

3.低纳克级灵敏度和低背景。

4.不涉及抗体。

 

艾美捷 Nanoprobes GoldiBlot TM的应用包括:

1.快速、可靠地识别细胞裂解物和提取物中的 His 标签蛋白。

2.更快、更简单的蛋白质印迹。

3.确认转染细胞中他标记的报告蛋白的表达。

 

参考文献:

Dubendorff, J.; Cruz, M.; Gonzalez, C.; Hainfeld, J.; Liu, W.: Rapid Detection of His-tagged Proteins on Western Blots Proc. 47th Ann. Mtg., Amer. Soc. Cell Biol., 47; Pres. # 1918., poster # B265 (2007).

Abstract (courtesy of the American Society for Cell Biology).

 

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来源:https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml

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Nanoprobes Nanogold标签:助力显示SAP-1 的分布和功能

 

当前Genes to Cells上发表了一篇论文. 作者使用 Nanogold 标记和 HQ Silver 开发来帮助阐明胃癌相关蛋白酪氨酸磷酸酶 1 (SAP-1) 的功能及其与胃肠道癌的关系。SAP-1 (PTPRH) 是一种受体型蛋白酪氨酸磷酸酶 (RPTP),在其细胞质区域具有单个催化结构域,在其细胞外区域具有 III 型纤连蛋白样结构域。直到最近,这种 RPTP 的细胞定位和生物学功能仍然未知。

 

在这项研究中,作者产生了一种针对 SAP-1(克隆 123)的单克隆抗体 (mAb),然后使用二次免疫荧光和 艾美捷 Nanoprobes Nanogold 标记来研究这种蛋白质在小鼠胃肠道内的分布。

 

分辨率优势:

艾美捷 Nanoprobes Nanogold-Fab' 与常规 5 nm 胶体金-IgG 探针的尺寸比较,显示了整体探针尺寸和金与目标的距离。由于其位于铰链区,Nanogold 在结合时更靠近目标,但不会阻碍或干扰结合。此外,其较小的尺寸允许更密集的标记,并有助于渗透到组织中并获得受阻抗原。

 

用这种 mAb 进行的免疫印迹分析揭示了大约 250-kDa SAP-1 蛋白在肠道中的显着表达,以及在睾丸中的低水平表达。十二指肠或空肠中的SAP-1含量明显高于胃或结肠。对 SAP-1 mAb 的免疫组织荧光显示 SAP-1 定位于肠上皮细胞的顶端表面,类似于埃兹蛋白或碱性磷酸酶,已知这两种酶都定位于肠上皮的微绒毛。在鬼笔环肽显示的 F-肌动蛋白显着染色上方立即检测到 SAP-1 免疫反应性,这可能对应于肠上皮细胞刷状缘处的末端网。

 

对于免疫电子显微镜研究,通过腹膜内 (ip) 注射 25 mg/kg 重量的戊巴比妥钠对小鼠进行麻醉,然后在 0.1 M 二甲胂酸钠缓冲液 (pH 7.4) 中经心灌注 2% PFA 2.5% 戊二醛。取出组织并在相同的固定剂中在 4°C 下浸泡 1 小时,然后在 4°C 下与相同缓冲液中的1% OsO 4一起孵育 1 小时。然后将它们脱水并嵌入 Epon。对于免疫 EM,组织样品在室温下通过在含有 4% 多聚甲醛 (PFA) 1% 戊二醛的磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 中浸泡 2 小时进行固定。使用 mAb 对小鼠 SAP-1 Nanogold 标记的 Fab' 山羊抗大鼠 IgG制备和处理 10 µm 厚的冷冻切片进行免疫染色. 使用HQ Silver Enhancement 套件增强信号。银增强完成后,切片再次用1% OsO 40.1% 亚铁氰化钾固定,最后包埋在Epon中。然后制备超薄切片(90 nm),用乙酸双氧铀和柠檬酸铅染色,并用 JEM 1010 电子显微镜(JEOL)检查。

 

标记模式分析证实SAP-1蛋白定位于胃肠上皮细胞刷状缘微绒毛;小鼠 SAP-1 mRNA 主要局限于胃肠道。其他实验发现,SAP-1 在小鼠肠道中的表达在胚胎发育期间最小,但在出生后显着增加,与肠上皮细胞的分化一致。SAP-1缺陷小鼠的肠上皮形态没有明显变化。然而,SAP-1 消融抑制了腺瘤性结肠息肉基因杂合突变小鼠的肿瘤发生,导致大腺瘤(> 2 mm)减少。这些结果表明 SAP-1 是一种微绒毛特异性 RPTP,可调节肠道肿瘤发生。

 

艾美捷 Nanoprobes Nanogold-Fab' 参考文献:

Sadakata, H.; Okazawa, H.; Sato, T.; Supriatna, Y.; Ohnishi, H.; Kusakari, S.; Murata, Y.; Ito, T.; Nishiyama, U.; Minegishi, T.; Harada, A., and Matozaki, T.: SAP-1 is a microvillus-specific protein tyrosine phosphatase that modulates intestinal tumorigenesis. Genes Cells, 14, 295-308 (2009).

Abstract (courtesy of Wiley Interscience).

 

Nanoprobes专注于免疫金标记和免疫测定试验领域,为广大科研机构提供用于检测生物分子的最灵敏的试剂和技术。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/Nanoprobes.shtml

 

 

 

(来源: 武汉艾美捷科技有限公司


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