血培养操作规程

【标本要求】

采集原则：

培养瓶的消毒：加70％的异丙基乙醇到橡胶塞1分钟。

无菌操作抽取静脉血，成人5～10ml，幼儿1～5ml，（血液与增菌之比1：5～1：10），采血后立即行无菌操作将血液接种于血液培养瓶内，混匀立即送检。

转运：最好立即送检，否则保温35度2H内。

采集次数：

急性脓毒病，10min内从不同部位采2～3套

急性心内膜炎，1～2h内从3个不同体位采3套

亚急性心内膜炎，从3个分离部位采3套，间隔≥15min，如24h为阴性，要再采3套。

原因不明发热，从不同体位采2～3套，间隔≥1h，如24h为阴性，要再采3套。

研究表明大于95％的菌血症可以通过前两次或前三次培养检测到，因此没有必要行更多的培养

【仪器】

Bact/Alert120全自动血培养仪，Organon Teknika Corp。适于细菌培养和真菌培养。

【试剂及配套品】

中和抗生素成人血培养瓶

中和抗生素儿童血培养瓶

成人血培养瓶

儿童血培养瓶

厌氧血培养瓶

通气针

羊血平板、巧克力平板

【操作步骤】

1、将培养瓶按仪器说明编号、扫描、放入仪器指定孔内。

2、一旦提示阳性结果，涂片行革兰染色，根据镜检结果决定

转种羊血平皿及巧克力平皿上，并分别放置普通培养箱及CO2烛缸内350C～37℃孵育培养需氧和兼性厌氧菌；转种布氏血琼脂，厌氧环境培养厌氧菌；转种沙保罗培养基，培养真菌。

3、将革兰染色结果立即向临床电话初级报告。

4、待细菌鉴定及药敏结果出来后再向临床发出最终报告。

【报告时间】

阴性：五天发报告（真菌培养七天发报告）

阳性：报告时间不定，一般3～7天

【特别提醒】

1、厌氧菌  从血液中培养出厌氧菌的比率相对比较少，不推荐每个病人常规增加一个厌氧血培养，但如果必要，选用其配套的厌氧培养基来培养厌氧菌。

2、营养苛刻的细菌（Fastidious Bacteria） 

布鲁氏菌属可以在常规血液培养基中生长，并且尽管可以在三天内分离到，但是推荐培养21天，且有必要进行末次接种。

HACEK群细菌—嗜泡沫嗜血杆菌（Haemphilus aphrophilus）、放线共生放线杆菌（Actinobacillus actinomycemcomitans）、人心杆菌(Cardiobacterium hominis)、侵袭埃肯菌(Eikenellus corrodens)和金氏杆菌（Kingella kingae）与细菌性心内膜炎有关，常规血培养基中可以分离，但培养14天和进行肉汤末次接种会更有效。

当临床症状提示为弗朗西丝菌（Francisella）感染时，阳性血液培养物需要接种到BCYE琼脂培养基，所有操作应在生物安全三级的层流罩超净台中进行。

常规血液培养基不能分离钩端螺旋体。

从血液中分离汉氏巴尔通体（Bartonella henselae）

3、分枝杆菌（Mycobacteria）  使用常规血培养基不能分离。

4、导管头  培养导管头是为了明确细菌来源。最常用的方法是半定量的方法，方法是用5cm长的导管末端部分在血液琼脂平板上滚动4次。培养物出现15个以上的菌落，提示有潜在的导管相关性感染。

【注意事项】

1、凡需做血液培养的患者，最好在不同的时间抽血三次。

2、应在病人发热初期或发热高峰使用抗生素之前抽血，对已经使用过抗生素的患者应在下一次用药前抽取血标本。

3、血液培养瓶根据临床需要可供选择的有：普通培养瓶、中和抗生素瓶、厌氧菌培养瓶及儿童专用培养瓶。

4、一旦血液注入血培养瓶后，严禁放入冰箱。

5、心包液、胸腔液、腹腔液、骨髓、脑脊液以及浆膜腔积液均可用血液培养瓶增菌。