抗肿瘤药物筛选——细胞水平实验丨Edu细胞增殖检测

细胞水平的细胞增殖是生物医学领域非常重要的表型，对细胞增殖的检测是检验药物对肿瘤细胞影响的最主要检测手段。作为细胞水平检测增殖现象的传统方法，cck8比色法，Edu细胞增殖检测在细胞增殖检测中被广泛应用。

一、传统的肿瘤治疗方法

1.外科手术治疗

2.放射线治疗

3.化学药物治疗

众所周知，化疗会产生很多不良反应，比如：骨髓抑制(血细胞减少)、胃肠道反应、脱发、发热、皮疹、心脏毒性、肝脏毒性、神经毒性、泌尿道毒性、局部静脉炎、致畸、致突变、致癌等等。那么持续不断地寻找更好的抗肿瘤药物势在必行。

天然产物在新药及新药先导化合物的发现中起着不可替代的作用，是结构新颖和作用独特的抗肿瘤化合物的重要来源。美国国立癌症研究所(NCI)从1955年开始从天然产物中筛选抗肿瘤药物。目前世界上被批准广泛使用的抗肿瘤药物中,50 %以上来源于天然产物。那么问题来了~

如何进行抗肿瘤药物的筛选？ 以及主要用到哪些实验方法？

实际上，抗肿瘤药物的筛选体系复杂，涉及到宏观到微观水平的一系列实验。在这里小编，就简要梳理一下抗肿瘤筛选的关键流程吧：

二、动物水平的筛选流程：

三、细胞水平的筛选

①抑制肿瘤细胞增殖实验

②诱导肿瘤细胞分化实验

③诱导肿瘤细胞凋亡实验

④抗肿瘤血管生成实验

⑤肿瘤多药耐药性逆转实验

⑥抗肿瘤侵袭和转移实验

⑦诱导肿瘤细胞自噬实验

四、抑制肿瘤细胞增殖实验

细胞水平检测增殖现象的传统方法主要有：1）cck8比色法；2）Edu细胞增殖检测；

1）cck8比色法

CCK8是基于WST-8的一种细胞增殖检测方法，WST-8是一种水溶性四唑盐，常用于评估细胞的代谢活性。在中性pH值及中间电子受体存在的情况下，被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的蓝/紫色甲臜产物（formazan）。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。

2）Edu细胞增殖检测

如果你需要获取更直观和准确的细胞增殖数据，那么就用Edu细胞增殖检测法。EdU细胞增殖检测可以直接并准确地检测出新DNA的合成。这种检测不仅能够测定单个细胞的增殖，还可以通过任何平台检测出细胞、组织或整个有机体中的增殖细胞。EdU细胞增殖方法简单，灵敏，方便，快速，准确，无需DNA变性，能够与各种抗体或荧光蛋白同时标记，以检测细胞其他性状特征，是细胞增殖检测的最佳选择。

Hela细胞Edu细胞增殖检测结果，蓝色荧光为DAPI染色的细胞核，红色荧光为EdU标记的增殖细胞；（细胞增殖成像分析试剂盒（EdU法）(橘红色荧光),cat#KTA2031,Abbkine）

文章来源：细胞水平的抗肿瘤药物的筛选——细胞增殖检测

http://www.abbkine.cn/antineoplastic-cell-proliferation

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如何对单个基因的DNA甲基化水平进行检测？

众所周知，p-1030、p-1032和p-9005这3个试剂盒都是用来检测总体水平的5mC、5hmC和m6A的量，不能检测单个基因的。那么现在就来聊聊，如何检测单个基因的DNA甲基化水平，比如DNA 5mC甲基化水平、5hmC甲基化水平，以及RNA m6A甲基化水平。

一、如何定量检测某基因的DNA 5mC甲基化水平？

如果是检测总的，一个p-1030或者p-1034就可以搞定，简单快捷，结果还好看。但是针对特定基因的话，就不能用这么用了，参照以下：

1.BSP是甲基化检测的金标准，这里就不细说了。主要说说MSP—甲基化特异性PCR。MSP的实验过程简单来说就是提取样本中的DNA进行亚硫酸盐转换，最后将转换的DNA进行定量PCR，由此来确定特异基因甲基化修饰。Cat#p-1026 BisulFlash DNA Modification Kit 搭配 Cat#p-1028 Methylamp MS-qPCR Fast Kit

搭配描述：用户可用自己的方式提取DNA，再用p-1026进行亚硫酸盐转换，转换后甲基化的5-mC保持不变，没有甲基化C转换成U。之后用p-1028进行MS-qPCR，针对目的基因设计一对靶向甲基化区域的引物进行PCR即可。而且用我们的MS-qPCR可将时间缩短到70min（1h 10min）钟哟，普通的一般需要（2.5h）

转换流程和结果展示：

2.IP是个非常常用的技术手段，有些人以为IP只能下拉蛋白，是不是？IP抗体+磁珠，下拉下来的不就是蛋白嘛！但是，如果你现在需要的IP试剂盒是含有5mC的DNA对吧？Cat# p-1015：Methylamp Methylated DNA Capture (MeDIP) Kit Cat# p-1052：EpiQuik MeDIP Ultra Kit 搭配 Cat# p-1028：Methylamp MS-qPCR Fast Kit Cat# p-1029:  EpiQuik? Quantitative PCR Fast Kit

搭配描述：用户可用自己的方式提取DNA，再用p-1015或者p-1052进行5mC甲基化DNA下拉富集，再用p-1028进行甲基化特异性PCR实验，进行特异基因甲基化的定量。也可以使用p-1029进行qPCR。

富集流程+结果展示：

二、如何定量检测某基因的 5hmC甲基化水平？

关于DNA羟甲基化的定量检测，检测总的话就是p-1032，基于ELISA的方法，可进行绝对的定量。而特异基因的5hmC检测参照的方式与5mC的一样，也是先IP下来所有的5hmC DNA，再进行定量检测。

Cat# p-1038：EpiQuik Hydroxymethylated DNA Immunoprecipitation (hMeDIP) Kit 搭配 Cat# p-1029:  EpiQuik Quantitative PCR Fast Kit

搭配描述：客户可用自己的方式提取DNA，再用p-1038进行5hmC甲基化DNA下拉富集，再用p-1029，进行特异基因5hmC甲基化的定量。

富集流程+结果展示：

三、如何定量检测某基因的 RNA m6A甲基化水平？

很多小伙伴想用p-9005这个试剂盒来检测单个基因的m6A的量。但是，它也不能检测单个基因的RNA m6A的量。所以，至于如何进行单个基因的，先进行IP，再进行PCR实验，这里就多了一步反转录。Cat# p-9018：EpiQuik CUT&RUN m6A RNA Enrichment (MeRIP) Kit Cat# 202-003：m6A 抗体 搭配 Cat# p-1029:  EpiQuik? Quantitative PCR Fast Kit

搭配描述：用户可用自己的方式提取RNA，用p-9018进行m6A RNA富集，将富集后的m6A RNA进行发转录后，进行qPCR。也可以使用p-9018和202-003 m6A抗体，进行IP实验，适用实验类型多，物种广。

富集流程+结果展示：

文章来源：如何定量检测目的基因甲基化水平

https://www.amyjet.com/featured/m6a-5mc-5hmc.shtml