【AbMole科研快报】toll样受体4在晚期糖基化终产物诱导的M1巨噬细胞极化中起关键作用

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本研究旨在研究toll样受体4 (TLR4)在晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导巨噬细胞向M1方向极化中的作用。在研究中，研究人员将分离的初代巨噬细胞以0、2.5、5和10 mmol/L的浓度暴露于制备的培养基中。巨噬细胞还暴露于过氧化氢(H2O2)中，以提供外源性活性氧(ROS)。AGEs受体(RAGE)通过载体过度表达。特异性siRNA沉默TLR4和抑制剂TAK -242用以预处理巨噬细胞。在检测环节，分别利用DCFH-DA测定细胞内ROS、免疫荧光染色评价M1巨噬细胞表型标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达、PCR检测TLR4和RAGE的mRNA表达水平、免疫印迹法检测细胞质RAGE、TLR4、核信号转导器和转录激活因子1 (STAT1)蛋白表达水平及STAT1磷酸化水平、ELISA法测定巨噬细胞细胞培养液上清中IL6、IL12和肿瘤坏死因子TNF-ɑ的浓度。

结果显示，AGEs显著提高细胞内ROS生成、iNOS表达水平、胞质RAGE、TLR4、核STAT1、胞质STAT1磷酸化水平以及IL6、IL12和TNF-ɑ含量，且呈浓度依赖性。在AGEs暴露的巨噬细胞中，TLR4沉默和抑制剂预处理降低了细胞质RAGE、TLR4、STAT1和核STAT1的表达水平，而不影响RAGE表达和细胞内ROS生成水平。RAGE过表达使巨噬细胞中ROS和TLR4表达水平升高。在H2O2处理的巨噬细胞中也发现TLR4表达升高。总结来说，AGEs通过激活RAGE/ROS/TLR4/STAT1信号通路诱导巨噬细胞向M1极化。

TAK-242 (Abmole, M4838，纯度 ＞98%) 是TLR4信号通路抑制剂，能通过结合TLR4胞内区域抑制脂多糖诱导的炎症介质的产生。研究人员拍摄了iNOS、DAPI的免疫荧光染色图像，并标示出分别经TLR4 - siRNA或TLR4特异性抑制剂TAK-242预处理的AGEs暴露巨噬细胞后的平均荧光强度，以研究TLR4对巨噬细胞M1极化的影响。其中TAK-242购自于Abmole。