【AbMole科研快报】酯蟾毒配基RB通过抑制GPX4介导铁死亡和ROS生成

AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：酯蟾毒配基 (RB)通过抑制GPX4介导铁死亡和ROS生成，抑制结直肠癌细胞的生长和肿瘤发生

酯蟾毒配基(RB)已被用于癌症治疗，但其潜在机制尚不明晰。本研究旨在研究RB治疗对结直肠癌(CRC)细胞的影响，并探讨其作用机制。

具体来说，研究人员采用细胞计数kit-8 (CCK-8)法测定细胞活力；通过光学显微镜观察细胞形态，采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。细胞内亚铁(Fe2+)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和活性氧(ROS)水平分别采用商业化的铁定量试剂盒、MDA测定试剂盒、GSH测定试剂盒和2,7 -二氯二氢荧光素二乙酸(DCFH-DA)探针检测。免疫印迹法和免疫组化法则用于测定蛋白表达。

从实验结果可知，RB以剂量和时间依赖的方式抑制CRC细胞系(HT29和SW480)的细胞活力，并在高剂量下对正常结肠上皮细胞系(NCM460)产生细胞毒性。RB同样可以诱导CRC细胞的形态学改变，由正常变为圆形，促进细胞死亡。值得注意的是，RB在CRC细胞中引发氧化应激和细胞铁中毒死亡。只有铁死亡抑制剂(DFO和铁抑素-1)，而非其他类型细胞死亡(凋亡、自噬和坏死)的抑制剂，才能够逆转RB对CRC细胞增殖的抑制作用。此外，RB处理后谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPX4)失活，过表达的GPX4抑制了RB诱导的CRC细胞氧化死亡。体内实验证实RB也触发氧化应激，并在微分子上抑制CRC细胞生长和致瘤性。研究人员最终得出结论:RB通过GPX4失活依赖的方式触发铁致凋亡，抑制CRC细胞生长和肿瘤发生。

CCK-8试剂盒 (Abmole, M4839) 为MTT 法的替代方法，是一种基于WST(水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

作者在研究过程中，研究并验证了RB以剂量和时间依赖的方式抑制CRC细胞(HT29和SW480)和正常结肠上皮细胞(NCM460)的增殖。该实验中，将上述细胞分别暴露于不同浓度(0、5、10和20μM)的RB中24 h和48 h。此后，采用CCK-8法测定细胞存活率。CCK-8即购自Abmole,在研究中发挥了重要的作用。